O tempo do ensaio é consideravelmente reduzido de cerca de uma hora para alguns minutos pelo método RTF-EXPAR recentemente relatado, que utiliza abordagem livre de transcriptase reversa (RTF) para conversão de RNA para dentro DNA seguido por EXPAR (Reação de Amplificação Exponencial) para amplificação em temperatura única.
Controlando a taxa de Covid-19 a propagação requer uma estratégia de teste de vírus precisa e mais rápida. RT-PCR (reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa), o método de teste mais preciso atualmente empregado é um teste de duas etapas que leva cerca de 60 minutos por amostra.
Os pesquisadores da Universidade de Birmingham relataram um novo método para a detecção de SARS-CoV-2. Isso pode permitir um teste muito mais rápido e é suficientemente sensível.
A detecção de RNA viral por RT-PCR (reação em cadeia da polimerase de transcriptase reversa) envolve a conversão do RNA viral em DNA complementar (cDNA) seguido pela amplificação do cDNA por um PCR quantitativo (qPCR). O cDNA é então detectado usando um corante fluorescente. Isso leva até uma hora.
O tempo do ensaio é consideravelmente reduzido de cerca de uma hora para alguns minutos pelo método RTF-EXPAR recentemente relatado, que utiliza abordagem livre de transcriptase reversa (RTF) para conversão de RNA em DNA seguido por EXPAR (Reação de Amplificação Exponencial) para amplificação em temperatura única. A amplificação que ocorre em uma única temperatura é a chave para a velocidade, pois evita longas etapas de aquecimento e resfriamento do RT-PCR. Além disso, a secção de ADN a ser amplificada é menor em comparação com o RT-PCR. Conseqüentemente, EXPAR gera até 108 fitas de produto de DNA em poucos minutos. A formação do duplex é monitorada, como no método RT-PCR utilizando corante fluorescente, SYBR Green.
Curiosamente, o novo método pode ser modificado para detectar várias outras doenças infecciosas causadas por vírus de RNA, por exemplo, Ebola, RSV, etc.
Fonte (s):
Carter et al (2020). Detecção em sub-5 minutos de RNA SARS-CoV-2 usando uma reação de amplificação exponencial livre de transcriptase reversa, RTF-EXPAR. Pré-impressão. Publicado em medRxiv Postado em 04 de janeiro de 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
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