Os testes de laboratório para o diagnóstico de COVID-19 atualmente em prática, conforme recomendado por organismos internacionais de especialistas, são revisados e avaliados.
O COVID-19 doença, que se originou em Wuhan China, afetou mais de 208 países até agora. A comunidade científica em todo o mundo enfrentou um desafio significativo nos últimos meses, para desenvolver testes de diagnóstico para Covid-19 detecção de doenças, a fim de rastrear pacientes e indivíduos suspeitos, a fim de gerenciar e controlar eficazmente a pandemia.
Antes de avaliarmos os métodos e práticas atuais usados para a detecção de COVID-19, vamos primeiro entender o que causa COVID-19 e como desenvolver testes de diagnóstico para triagem de pacientes para essa doença. A doença COVID-19 é causada por um RNA de fita positiva vírus que são zoonóticas, o que significa que podem cruzar as barreiras de espécies de animais para humanos e podem causar, em humanos, doenças que vão desde o resfriado comum até doenças mais graves, como MERS e SARS. O vírus causador do COVID-19 foi agora denominado SARS-CoV-2 pelo Comitê Internacional de Taxonomia de Vírus (ICTV), por ser muito semelhante ao que causou o surto de SARS (SARS-CoVs). O teste de diagnóstico para a doença COVID-19 pode ser desenvolvido de várias maneiras.
O método mais popular e atualmente adotado em todo o mundo é desenvolver um teste diagnóstico que possa detectar o próprio vírus SARS-CoV-2. Esse teste baseia-se na detecção do genoma viral na amostra do paciente por RT-PCR em tempo real (reação em cadeia da polimerase em tempo real com transcriptase reversa). Isso envolve a conversão do RNA viral em DNA usando uma enzima chamada transcriptase reversa e, em seguida, amplificando o DNA usando um conjunto específico de primers e uma sonda fluorescente, que se ligam a uma região específica no DNA viral, usando uma Taq polimerase e detectando o sinal fluorescente. Esses testes são chamados de NAATs (testes de amplificação de ácido nucléico). Esta técnica pode ser muito útil para a detecção muito precoce da presença de ácido nucleico na amostra do paciente, mesmo em pacientes assintomáticos que não apresentam sintomas da doença COVID-19 (especialmente no período de incubação de 14-28 dias) e na parte posterior também quando a doença está em plena expansão.
Várias empresas ao redor do mundo têm trabalhado em uma corrida contra o tempo durante os últimos meses para desenvolver um teste de diagnóstico baseado em NAAT para a detecção de SARS-CoV-2 com base nas diretrizes do CDC (Center for Disease Control), Atlanta, EUA e OMS ( 1, 2). As autoridades de saúde em todo o mundo têm aprovado esses testes para uso emergencial para a detecção do SARS-CoV-2. Os genes virais direcionados até agora incluem os genes N, E, S e RdRP, juntamente com controles positivos e negativos apropriados. As amostras de pacientes a serem coletadas para tal teste são do trato respiratório superior (swab nasofaríngeo e orofaríngeo) e / ou do trato respiratório inferior (escarro e / ou aspirado endotraqueal ou lavado broncoalveolar). No entanto, também é possível detectar o vírus em outras amostras, incluindo fezes e sangue. As amostras devem ser coletadas rapidamente, de forma adequada, tomando todos os cuidados necessários e aderindo às práticas de biossegurança (conforme diretrizes da OMS [1]), de pacientes que atendam à definição de caso suspeito para COVID-19, preservando-o e embalando-o bem se precisar ser transportado para o centro de diagnóstico e então processado (extração de RNA em uma cabine de biossegurança em um BSL-2 ou instalação equivalente) rapidamente de forma a garantir a integridade da amostra. Tudo isso deve ser realizado de forma prioritária para um melhor manejo clínico e controle de surtos.
O tempo de detecção para vários testes baseados em NAAT disponíveis desenvolvidos pelas principais empresas de diagnóstico em todo o mundo variam de 45 minutos a 3.5 horas. Várias melhorias estão sendo feitas nesses testes para convertê-los em testes de ponto de atendimento e alcançar os resultados desejados no menor tempo possível, sem comprometer a precisão do resultado, para aumentar o número de testes que podem ser feitos em um dia.
Outras opções de teste de diagnóstico são testes de diagnóstico rápido (RDTs) que detectam antígenos / proteínas virais que são expressos na superfície das partículas do vírus SARS-CoV-2 à medida que se replicam nas células hospedeiras e causam doenças ou anticorpos do hospedeiro em resposta à infecção; esse teste detecta a presença de anticorpos no sangue de pessoas que se acredita terem sido infectadas com COVID-19 (3).
A precisão e reprodutibilidade do RDT para detectar antígenos virais depende de vários fatores, incluindo o tempo desde o início da doença, a concentração do vírus na amostra, a qualidade e o processamento da amostra e a formulação dos reagentes presentes nos kits de teste. Devido a essas variáveis, a sensibilidade desses testes pode variar de 34% a 80%. Uma grande desvantagem dessa opção é que o vírus precisa estar em seu estágio replicativo e infeccioso para detectar as proteínas virais.
Da mesma forma, os testes que detectam anticorpos do hospedeiro são baseados na força da resposta do anticorpo, que depende de fatores como idade, estado nutricional, gravidade da doença e certos medicamentos ou infecções que suprimem o sistema imunológico. Uma grande desvantagem dessa opção é que os anticorpos são produzidos ao longo de dias a semanas após a infecção com o vírus SARS-CoV-2 e é necessário esperar tanto tempo para realizar o teste. Isso significa que um diagnóstico de infecção por COVID-19 com base na resposta de anticorpos do hospedeiro muitas vezes só será possível na fase de recuperação, quando muitas das oportunidades para intervenção clínica ou prevenção da transmissão da doença já passaram.
Atualmente, os RDTs mencionados acima só foram aprovados em ambiente de pesquisa e não para diagnóstico clínico devido à falta de dados (3, 4). À medida que mais e mais dados epidemiológicos se tornam disponíveis para COVID-19, mais RDTs serão desenvolvidos e aprovados como testes de ponto de atendimento em um ambiente clínico, uma vez que podem dar resultados em 10-30 minutos, ao contrário dos testes baseados em NAAT que, em média, demoram poucas horas para detectar a doença.
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Referências:
1. WHO, 2020. Laboratory Testing Strategy Recommendations for COVID-19. Orientação provisória. 21 de março de 2020. Disponível online em https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Acessado em 09 de abril de 2020
2. CDC 2020. Informações para laboratórios. Orientação provisória para laboratórios disponível online em https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Acessado em 09 de abril de 2020.
3. OMS, 2020. Conselhos sobre o uso de testes pontuais. Resumo científico. 08 de abril de 2020. Disponível online em https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Acessado em 09 de abril de 2020.
4. ECDC, 2020. Uma Visão Geral da Situação do Teste Rápido para o Diagnóstico COVID-19 na UE / EEE. 01 de abril de 2020. Centro Europeu de Prevenção e Controle de Doenças. Disponível online em https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Acessado em 09 de abril de 2020
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